První hříbě, které bylo vyprodukováno in vitro, se narodilo v roce 1996. Toto hříbě bylo vytvořeno z in vivo zralého oocytu od dárkové klisny, který byl získán prostřednictvím TVA, oplodněn v laboratoři pomocí ICSI, kultivován do formy embrya (blastocysty) a přeneseno zpět do dárkové klisny. To je zjednodušené vysvětlení postupů, které provádíme k produkci embryí in vitro. Prvním krokem k produkci embryí in vitro je získání oocytů (vajíček) z vaječníků dárkové klisny. To může být provedeno buď seškrábáním folikulů ze sklízených vaječníků, pokud klisna zemřela, nebo TVA, když je klisna stále naživu. U uhynulých klisen lze vaječníky sklízet a oocyty získávat z folikulů přítomných na vaječníku. K získání oocytů od živých klisen se v mnoha reprodukčních praktikách stala běžnou metodou aspirace oocytů za pomoci transvaginální ultrazvukové kontroly. Toto je ambulantní procedura prováděná při sedaci, kdy je klisna zajištěna ve stáji. Vaječníky jsou zobrazovány pomocí ultrazvuku umístěného ve vagíně a každý folikul na vaječníku je propíchnut, seškrábán a několikrát opláchnut tekutinou. Existují dva typy folikulů, které mohou být během TVA aspirací, dominantní folikuly stimulované gonadotropiny a nezralé folikuly. Získávání oocytů je z dominantních folikulů vyšší díky uvolnění těsného spojení mezi oocytem a okolními cumulusovými buňkami, které jsou přítomny v nezralých folikulech. Typické míry zotavení pro zralý oocyt jsou 65-80%, zatímco míry zotavení pro nezralé oocyty jsou 43-58%, avšak míry se mohou lišit mezi laboratořemi. I když jsou míry zotavení vyšší pro oocyty v zralých folikulech, obvykle je získán pouze 1 oocyt, zatímco všechny nezralé folikuly mohou být aspirací a získáno více oocytů. Jakmile jsou oocyty získány, jsou zpracovány a přepraveny do laboratoře, kde se provádí ICSI a kultivace embryí.
Nedávný výzkum ukázal, že konvenční in vitro fertilizace může být za určitých podmínek opakovatelná u koně [5]. V současné době je však ICSI stále nejspolehlivější metodou pro produkci embryí in vitro. Když nezralé oocyty dorazí do laboratoře ICSI, typicky 24 hodin po provedení TVA, umístí se do dozrávacího kultivačního média. Rychlost zrání se mezi laboratořemi liší, ale typicky se pohybuje kolem 50–60 % [4,6,7]. Intracytoplazmatická injekce spermie zahrnuje výběr 1 spermie a injekci této spermie do zralého oocytu. Injikovaný oocyt je poté umístěn zpět do kultivačního média a kultivován po dobu 7-10 dnů pro produkci embrya. Míra produkce embryí se také liší mezi laboratořemi, ale je asi 20 % [1, 2]. Jakákoli vyprodukovaná embrya mohou být buď přímo přenesena do klisen příjemců, nebo mohou být kryokonzervována pro pozdější přenos. Míra zabřeznutí z embryí přenesených přímo příjemcům se významně neliší od konvenčně získaných embryí, 60–75 % [8]. Transvaginální ultrazvukem řízená aspirace oocytů může být provedena kdykoli během cyklu klisny a kdykoli během roku, pokud jsou na vaječnících přítomny folikuly [4, 9]. Aspirace lze provádět každé dva týdny s malým dopadem na počet folikulů, fertilitu klisen a plán výstav [4, 10, 11]. Transvaginální ultrazvukem řízená aspirace oocytů a ICSI umožňují produkci embryí od klisen s reprodukčními abnormalitami děložního čípku, dělohy a vejcovodů nebo těch, které byly neúspěšné v konvenčním chovu nebo programech přenosu embryí. Nedávné údaje ukázaly, že starší klisny měly vyšší reprodukční účinnost s TVA-ICSI oproti přirozenému chovu, umělé inseminaci a výplachu a transferu embryí. Také sperma hřebců se špatnou plodností nebo nízkými zásobami spermatu lze využít k produkci hříbat pomocí těchto technik. Oblast reprodukce koní se rychle mění a nové techniky asistované reprodukce umožňující genetické uchování klisen budou v příštích 10 letech pokračovat v pokroku.
Zdroj: www.selectbreeders.com